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本類藥物一般為周期特異性藥物，化學結構與細胞生長繁殖所必需的物質如葉酸、嘌呤堿、嘧啶堿等相似，能競爭性地拮抗相關的物質代謝，干擾DNA的正常生物合成過程；也可作為偽底物摻入，使合成的核酸失去功能，因此也稱為抗代謝藥。這類藥物主要作用于細胞周期中的DNA合成期。
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